Vzorku môžete tiež odsoliť ultrafiltráciou na 1 desatinu predchádzajúceho objemu, znova ju zriediť a zopakovať krok UF. Najlepšia metóda na odsoľovanie je odsolenie gélovou filtráciou proti 50 mM pufru, ako ultrafiltrácia (klasická, nie odstredivá).
Čo je odsoľovanie pri čistení bielkovín?
Odsoľovanie sa používa na odstránenie solí z proteínových roztokov, fenolu alebo neinkorporovaných nukleotidov z nukleových kyselín alebo prebytočných sieťovacích alebo značkovacích činidiel z konjugovaných proteínov.
Ako čistíte bielkoviny?
Pri hromadnom čistení proteínov je bežným prvým krokom k izolácii proteínov precipitácia síranom amónnym (NH4) 2SO4. Toto sa uskutočňuje pridávaním zvyšujúcich sa množstiev síranu amónneho a zberom rôznych frakcií vyzrážaného proteínu. Následne možno síran amónny odstrániť dialýzou.
Ako vyrovnávate proteíny na výmenu?
Výmena pufra sa však uskutočňuje prvým ekvilibrovaním so živicou na kolóne s pufrom, v ktorom by mala vzorka skončiť. V oboch prípadoch zložky pufra prenášajú vzorku do kolóna bude nahradená roztokom, ktorým je kolóna vopred ekvilibrovaná.
Ktorú z nasledujúcich chromatografických techník možno použiť na odsoľovanie bielkovín?
Ako je uvedené vyššie, gélová filtrácia sa dá efektívne využiť na bielkovinyodsoľovanie a uskutočňuje sa tak, že sa gélová filtračná kolóna najskôr ekvilibruje vodou. Výmena pufra sa však uskutoční tak, že sa živica kolóny najskôr uvedie do rovnováhy s cieľovým pufrom.
