V prvom rade, EcoR1 aj Xba1 zanechávajú 5' presahy, keď trávia DNA (rovnako ako Nde1). V oboch prípadoch je 3' koniec zapustený, a preto môže polyermase pridať bázy. Po druhé, všetky polymerázy môžu pridávať bázy iba na 3' koniec, takže Klenow pridá 4 bázy k ustúpenému 3' koncu oboch miest na vytvorenie tupých koncov.
Zanechávajú reštrikčné enzýmy 5 fosfátov?
Vektory a inzerty štiepené reštrikčnými enzýmami obsahujú potrebné koncové modifikácie (5' fosfát a 3' hydroxyl), zatiaľ čo fragmenty vytvorené polymerázovou reťazovou reakciou (PCR) nemusia.
Dajú sa tupé konce podviazať?
Podviazanie tupého konca
Podviazanie tupého konca nezahŕňa párovanie báz vyčnievajúcich koncov, takže akýkoľvek tupý koniec možno podviazať s iným tupým koncom. Tupé konce môžu byť vytvorené reštrikčnými enzýmami, ako sú Smal a EcoRV.
Vytvára Taq polymeráza tupé konce?
Áno… Polymeráza Taq pridáva presahy A, ak ponecháte konečný krok predĺženia pri 72 dC na PCR. Väčšinou sa používa na klonovanie TA.
Prečo používať Klenowov fragment pri sekvenovaní DNA?
Klenowov fragment je mimoriadne užitočný pre výskumné úlohy, ako sú: Syntéza dvojvláknovej DNA z jednovláknových templátov . Vyplnenie ustupujúcich 3' koncov fragmentov DNA, aby sa 5' previs zatupil . Vytrávenie vyčnievajúcich 3' previsov.
