Nanášanie kontrolných protilátok sú dôležité kontroly, pretože indikujú rovnomerné naplnenie vzoriek do všetkých jamiek. Kontroly plnenia tiež indikujú správny prenos bielkovín na membránu počas procesu Western blotting. Kontroly načítania sú zvyčajne proteíny s vysokou a všadeprítomnou expresiou.
Na čo slúži kontrola načítania?
Kontrola nanášania je proteín používaný ako kontrola v experimente Western blotting. … Používajú sa na uistenie sa, že proteín bol naplnený rovnako vo všetkých jamkách.
Prečo používame pri Western blote kontrolu načítania?
Načítavanie ovládacích prvkov má vo westernových prenosoch druhú úlohu ako kontrola. Môžu sa použiť na kontrolu, či došlo k rovnomernému prenosu z gélu na membránu cez celý gél. Toto je nevyhnutné, keď sa porovnávajú hladiny expresie proteínov medzi vzorkami.
Ako používate ovládanie načítania vo Western blote?
Signály z kontrol načítania sa zvyčajne používajú na normalizáciu signálov z proteínov záujmu. Aby sa na tieto účely použila kontrola nanášania, detekcia s kontrolnou proteínovou protilátkou a experimentálnou protilátkou by sa mala vykonať na rovnakom blote. Množstvo rôznych proteínov sa používa ako kontrola nakladania.
Prečo sa aktín používa ako kontrola načítania?
Beta-aktín sa zvyčajne používa ako kontrola načítania pre Western Blot nanormalizovať hladiny detekovaného proteínu potvrdením, že proteínové zaťaženie je rovnaké v celom géli.
