Keď sa však emisné spektrá prekrývajú, môže byť detekovaná fluorescencia z viac ako jedného fluorochrómu. Na korekciu tohto spektrálneho prekrytia sa používa proces kompenzácie fluorescencie. To zaisťuje, že fluorescencia zistená v konkrétnom detektore pochádza z fluorochrómu, ktorý sa meria.
Prečo potrebujeme kompenzáciu v prietokovej cytometrii?
Pre experiment prietokovej cytometrie je potrebná kompenzácia kvôli fyzike fluorescencie. Fluorochróm je excitovaný a vyžaruje fotón v rozsahu vlnových dĺžok. Niektoré z týchto fotónov sa vysypú do druhého detektora, čo spôsobí, že jednotlivé zafarbené vzorky sa zdajú byť dvojito pozitívne.
Aký je hlavný účel použitia kompenzačnej bunky?
Primárnym účelom je umožniť meranie skutočnej fluorescencie v primárnom kanáli kontaminovanom presahom zo susedných fluoroforov. Preto kompenzácia koriguje fluorescenčné „prekročenie“medzi fluorofórmi. Nie je to však dokonalé a nedokáže vyriešiť všetky nežiaduce účinky.
Čo je matica kompenzácie?
Kompenzačná matica sa vypočítava pomocou jednofarebných fluorescenčných kontrolných súborov, ktoré sa zhromažďujú na ImageStream alebo FlowSight so všetkými zhromaždenými kanálmi a bez osvetlenia svetlého poľa alebo SSC.
Čo je spektrálna kompenzácia?
Používanie spektrakompenzácia znamená, že signál z neprimárnych detektorov sa stále používa na zlepšenie skutočného signálu markerov, kde je to možné. Primárne kontrolné vzorky sa používajú na pomenovanie parametrov. … Vzorky použité pre primárne detektory tiež pomáhajú pomenovať tieto parametre po spektrálnej kompenzácii.
