Keď sa bunky objavia oddelené, pridajte 2 objemy predhriateho kompletného rastového média na inaktiváciu trypsínu. Jemne dispergujte médium niekoľkonásobným pipetovaním po povrchu bunkovej vrstvy, aby ste zabezpečili obnovu >95 % buniek.
Ako zastavím aktivitu trypsínu?
Trávenie trypsínom možno zastaviť zmrazením alebo znížením pH reakcie pod pH 4 pridaním kyseliny mravčej, octovej alebo trifluóroctovej (trypsín obnoví aktivitu, keď pH je zvýšené nad pH 4). Natrávené vzorky možno skladovať pri teplote -20 °C.
Čo neutralizuje trypsín?
tlmivý roztok obsahujúci ióny vápnika a horčíka tiež spomaľuje aktivitu trypsínu. FBS je však účinnejší spôsob, ako inhibovať aktivitu trypsínu.
Inaktivuje sérum trypsín?
Sérum inaktivuje zvyškový trypsín zostávajúci z enzymatického trávenia obličiek a proteolytické enzýmy následne syntetizované bunkami. Čerstvo trypsinizované bunky mohli rásť na monovrstvy v neprítomnosti séra za predpokladu, že boli opakovane premyté, aby sa odstránil zvyškový trypsín.
Koľko médií je potrebných na deaktiváciu trypsínu?
Pokiaľ používate pomer aspoň 1:1 5-10% séra média obsahujúceho váš trypsín, mala by byť viac než dostatočná inhibícia, po ktorej nasleduje centrifugácia a výmena média za čerstvé médium.
