Čím väčšia je molekulová hmotnosť, tým je cievka dlhšia a molekula ide pomalšie. Takže elektroforéza + SDS sa oddeľuje na základe molekulovej hmotnosti, nie na základe prirodzeného náboja. Dôležitá poznámka: Proteíny rovnakej dĺžky sa zvyčajne nedajú oddeliť gélovou elektroforézou + SDS.
Ako oddeľujete proteíny rovnakej molekulovej hmotnosti?
Centrifugácia, elektroforéza a chromatografia sú najbežnejšie techniky na čistenie a analýzu proteínov. Centrifugácia oddeľuje proteíny na základe ich rýchlosti sedimentácie, ktorá je ovplyvnená ich hmotnosťou a tvarom.
Aké techniky separujú proteíny na základe poplatku?
Proteíny možno oddeliť na základe ich čistého náboja pomocou ionexovej chromatografie. Ak má proteín čistý kladný náboj pri pH 7, zvyčajne sa naviaže na stĺpec guľôčok obsahujúcich karboxylátové skupiny, zatiaľ čo záporne nabitý proteín nie (obrázok 4.4).
Ktorá z nasledujúcich techník je najvhodnejšia na oddelenie proteínov na základe molekulovej hmotnosti?
Chromatografické metódy založené na delení sú veľmi účinné pri separácii a identifikácii malých molekúl, ako sú aminokyseliny, sacharidy a mastné kyseliny. Avšak afinitné chromatografie (tj iónovo-výmenná chromatografia) sú účinnejšie pri separácii makromolekúl ako nukleových kyselín a proteínov.
Aký typ stĺpcachromatografia oddeľuje proteíny na základe molekulovej hmotnosti?
Gélová filtračná (GF) chromatografia oddeľuje proteíny výlučne na základe veľkosti molekuly. Separácia sa dosiahne pomocou poréznej matrice, ku ktorej majú molekuly zo stérických dôvodov rôzne stupne prístupu – t. j. menšie molekuly majú väčší prístup a väčšie molekuly sú z matrice vylúčené.
