Trypsinizácia je proces bunkovej disociácie pomocou trypsínu, proteolytického enzýmu, ktorý rozkladá proteíny, na disociáciu adherentných buniek z nádoby, v ktorej sa kultivujú. Keď sa trypsín pridá do bunkovej kultúry, rozkladá proteíny, ktoré umožňujú bunkám priľnúť k nádobe.
Prečo trypsinizujeme bunky?
Trypsinizácia sa často robí na povolenie prechodu buniek do novej nádoby, pozorovanie na účely experimentovania alebo zníženie stupňa konfluencie v banke odstránením percenta bunky.
Ako funguje trypsín pri oddeľovaní buniek?
Trypsín/EDTA je kombinovaná metóda na oddelenie buniek. Trypsín reže adhézne bielkoviny v interakciách bunka-bunka a bunka-matrica tým, že štiepi aminokyselinu adhéznych proteínov špecificky na lyzíne alebo aginíne na C-konci, ak protismerná aminokyselina nie je prolín.
Ako získate trypsinizované adherentné bunky?
Postup
- Odsajte médium z kultivačnej nádoby a premyte monovrstvu soľným roztokom bez Ca2+ a Mg 2+ na odstránenie všetkých stôp séra. …
- Do kultivačnej nádoby (nádobiek) nadávkujte dostatok trypsínu alebo roztoku trypsínu/EDTA, aby úplne pokryla monovrstvu buniek a umiestnite do inkubátora s teplotou 37 °C na ~2 minúty.
Ako deaktivujem trypsín v bunkovej kultúre?
Keď sa bunky objavia oddelené, pridajte 2 zväzkypredhriateho kompletného rastového média na inaktiváciutrypsínu. Jemne dispergujte médium niekoľkonásobným pipetovaním po povrchu bunkovej vrstvy, aby ste zabezpečili obnovu >95 % buniek. Pre kultúry bez séra, sójový inhibítor trypsínu (č. produktu
