Inkubujte nádobu pri izbovej teplote 2-3 minúty . Pevne priľnavé bunky možno rýchlo oddeliť pri 37 °C. Pozorujte bunky pod mikroskopom. Oddelené bunky vyzerajú pod mikroskopom zaoblené a lámavé.
Čo sa stane, ak trypsinizujete bunky príliš dlho?
Inkubácia buniek s príliš vysokou koncentráciou trypsínu počas príliš dlhého časového obdobia poškodí bunkové membrány a zabije bunky. Ak si nie ste istí koncentráciou trypsínu na použitie, použite nízku koncentráciu.
Ako vykonávate trypsinizáciu buniek?
Bunky môžu byť resuspendované jemným pipetovaním bunkovej suspenzie, aby sa rozbili zhluky. V prípade potreby je možné vykonať ďalšie riedenie pre počítanie buniek a/alebo subkultiváciu.
Ako dlho trvá pripojenie buniek?
prvé bunky sa pripájajú už po 3-5 min! Podľa mojich skúseností bola väčšina EC pripojená po 10-20 minútach. Ale čím dlhšie budete čakať, tým pevnejšia je príloha.
Je zlé trypsinizovať bunky dva dni po sebe?
Áno, je škodlivé, ak neustále trypsinizujete svoje bunky po 24 hodinách štiepenia. Odporúča sa robiť štiepenie po 48 hodinách štiepenia. … Môžete udržiavať bunky, kým nebude morfológia dobrá (závisí to od typu vašej bunky, niektoré bunky môžu prejsť až 80 pasážami a niektoré až 10).
